HS-D-5800P帶您解碼Oligo制備純化

更新時間：2026-04-23

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從 siRNA、ASO 到 mRNA 相關功能序列，寡核苷酸（Oligo）正在成為創(chuàng)新藥研發(fā)中的關鍵分子工具。但在研發(fā)推進過程中，真正決定篩選效率與結果可信度的，往往不是“能不能合成"，而是“能不能快速拿到足量、高純度、可重復的樣品"。對研發(fā)團隊而言，一套兼顧分離效率、方法靈活性、收集準確性與高通量排樣能力的制備平臺，已經成為 Oligo 純化環(huán)節(jié)的重要支撐。

為什么 Oligo 純化

更需要高壓制備平臺？

Oligo 極性強、保留相對較弱，對進樣方式、延遲體積、收集切換以及方法重現(xiàn)性都有更高要求。

在候選序列篩選階段，既要追求高通量，又要兼顧mg級樣品制備，以支撐體外機制研究、細胞實驗乃至早期體內評估。

因此，研發(fā)階段不僅需要“能分開"，更需要“穩(wěn)定分、快速分、批量分、精準收"。

HS-D-5800P：

為 Oligo 純化打造的高壓制備解決方案

HS-D-5800P 制備型高壓液相色譜系統(tǒng)具備 0–40 MPa 系統(tǒng)耐壓、1–150 mL/min 流速范圍，標配 UV-VIS 200–800 nm 雙波長檢測器，并可選配 ELSD。系統(tǒng)采用分體式自動進樣器與分體式二維餾分收集器設計，支持多規(guī)格樣品管與試管架配置，同時可擴展 5 mL 至 20 mL 定量環(huán)，兼顧方法開發(fā)、小試放大與高通量制備。

1. 更高耐壓，支持更小粒徑制備柱和柱串聯(lián)，釋放 Oligo 方法開發(fā)空間

2. 雙波長監(jiān)測 + 靈活收集，讓目標峰判斷更從容

3. 面向高通量的排樣與重復進樣能力

4. 獨立進樣與獨立收集，減少流程干擾

5. 報告與過程回溯更清晰

應用實證：

HS-D-5800P 完成 20nt Oligo 純化，

目標餾分純度最高達 99.7%

本次應用中為 50 OD 的 20nt Oligo粗品，樣品以 1 mL 水溶解后，經 0.22 μm 濾膜過濾。

粗品分析

色譜柱：Kinetex EVO C18, 2.6µm, 4.6×150mm

流動相A：水（400mM HFIP和16mMTEA）

流動相B：甲醇

檢測器：260 nm

流速：1.0 mL/min

柱溫：30℃

梯度：

制備條件采用 Kinetex EVO C18 5 μm 10×150 mm AXIA制備柱，流動相 A 為含 400 mM HFIP 與 16 mM TEA 的水相，流動相 B 為甲醇，流速 4 mL/min，檢測波長設置為 260 nm（主檢測）與 280 nm（監(jiān)測），進樣量 50 OD。

檢測結果

主峰 34.5–37.0 min 區(qū)間收集后，檢測純度可達到 97%。

其中后段主峰 35.7–37.0 min 餾分，檢測純度可達到 99.7%。
HS-D-5800P 的序列排樣搭配核殼類高柱效的制備柱，可用于 Oligo 樣品的高純度制備分離，為后續(xù)生物學評價提供可靠樣品基礎。

針對 Oligo 純化的實用方法建議

重視樣品過濾與流動相脫氣

樣品溶解后建議過濾，以降低顆粒污染、異常壓力波動和峰形異常風險；HFIP/TEA 類流動相應充分脫氣，并盡量減少與空氣長期接觸；若發(fā)現(xiàn)水相吸液端易夾帶氣泡或基線不穩(wěn)，可結合系統(tǒng)情況優(yōu)化吸液方式，并在檢測器后端適當增加背壓以提高信號穩(wěn)定性。

關注延遲體積對收集窗口的影響

在 10 mm 半制備柱、較低流速等條件下，檢測器至收集模塊之間的延遲體積對應的延遲時間會更明顯，但會準確繞讓過延遲體積，精準收集目標峰。

推薦采用“三明治進樣"優(yōu)化上樣表現(xiàn)

由于 Oligo 極性較大、保留相對較弱，建議關注樣品溶劑與初始流動相的匹配。必要時可采用三明治進樣（稀釋進樣）以改善峰形和進樣重現(xiàn)性。若采用定量環(huán)滿環(huán)進樣，應保證總吸樣體積充滿定量環(huán)。例如 5 mL 定量環(huán)可采用：流動相 A 3000 μL + 樣品 1000 μL + 流動相 A 1000 μL。

有機相選擇要與離子對體系匹配

在HFIP添加濃度較高、且流動相處于富水或特定配比時，乙腈可能帶來相分離/混濁風險，方法開發(fā)前應先驗證流動相相容性；若體系穩(wěn)定性不足，優(yōu)先考慮使用甲醇作為有機相。對存在明顯二級結構或分離難度較高的 Oligo 樣品，可結合序列特點進一步考察柱溫、離子對試劑濃度和梯度斜率，以提升分離度與方法穩(wěn)定性。

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