豬肉中四種硝基呋喃類(lèi)代謝物殘留量測(cè)定（SPE-LC/MS/MS）-依國(guó)標(biāo)

更新時(shí)間：2012-12-18

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一．實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>

本文使用天津博納艾杰爾科技有限公司的Cleanert^® PEP-2固相萃取柱、Venusil^® MP C18色譜柱和Qdaura卓睿^TM全自動(dòng)固相萃取儀，遵照中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《豬肉、牛肉、雞肉、豬肝和水產(chǎn)品中硝基呋喃類(lèi)代謝物殘留量的測(cè)定（GB/T 20752-2006）》提供的方法，檢測(cè)豬肉中的4種硝基呋喃類(lèi)代謝物殘留。

二．實(shí)驗(yàn)方法

2.1.樣品信息

2.2.樣品稱(chēng)取和脫脂

稱(chēng)取豬肉樣品2g（到0.01g），置于50m棕色離心管中，加入15ml甲醇-水混合溶液（v:v=2：1），均質(zhì)1min，再用5ml甲醇-水混合溶液洗滌刀頭，二者合并8000r/min離心5min，吸取上清液倒掉。

注：為更好的消除基質(zhì)效應(yīng)對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成的影響，可加入同位素內(nèi)標(biāo)，采用內(nèi)標(biāo)法定量檢測(cè)。

2.3.水解和衍生（注意避光）

向棕色離心管中加入20ml 0.2mol/l的鹽酸溶液，渦旋1min使之混合均勻，之后加入0.3ml濃度為0.05mol/L的2-硝基苯甲醛，混勻，于37℃溫水中避光衍生16小時(shí)。

2.4.凈化處理

將衍生后的樣品冷卻至室溫，加入5ml 0.1mol/l的磷酸氫二鉀，并用1 mol/l的氫氧化鈉溶液調(diào)PH約為7.4，混合均勻。之后用8000r/min離心10min,以小于2ml/min的流速過(guò)Cleanert^®PEP-2小柱（規(guī)格為60mg/3ml，用5ml甲醇、5ml水活化），并用10ml的水洗滌固相萃取小柱，然后負(fù)壓抽干柱子15min。用5ml乙酸乙酯洗脫于20ml棕色瓶中（此過(guò)程可在Qdaura卓睿^TM全自動(dòng)固相萃取儀上完成，儀器方法見(jiàn)附錄B）。洗脫液于40℃下氮?dú)獯蹈伞?/span>

用樣品定容溶液（10ml乙腈，0.3ml的乙酸用水稀釋至100ml）定容至1ml，充分溶解，并用0.22µm濾膜過(guò)濾。

2.5.檢測(cè)方法

色譜柱：Venusil^® MP C18（2.1×150mm，5µm，100Å）

質(zhì)譜儀：API 4000⁺

流動(dòng)相：A:0.1%甲酸的水溶液 B:0.1%甲酸的乙腈溶液

表1 梯度洗脫條件

時(shí)間（min）	A（%）	B（%）
0	80	20
1	80	20
3	50	50
7	25	75
7.1	5	95
10	5	95
10.1	80	20
16	80	20

流速：0.2mL/min

進(jìn)樣體積：5μL

離子源：電噴霧（ESI），正離子模式

掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）

表2 質(zhì)譜儀離子源參數(shù)

Source/Gas
Collision Gas（CAD）	6
Curtain Gas（CUR）	15
Ion Source Gas 1（GS 1）	50
Ion Source Gas 2（GS 2）	50
Ion Spray Voltage（IS）	5500
Temperature（TEM）	600
Interface Heater（ihe）	On

表3 4種硝基呋喃待測(cè)物母離子和子離子參數(shù)表

物質(zhì)名稱(chēng)	保留時(shí)間（min）	監(jiān)測(cè)離子對(duì)	DP	EP	CE	CXP
SEM	8.10	209.1/166.1	51	10	17	10
SEM	8.10	209.1/192.1	51	10	17	10
AHD	8.30	249.2/134.1	61	10	20	10
AHD	8.30	249.2/104.1	66	10	31	10
AOZ	8.89	236.2/134.1	61	10	20	10
AOZ	8.89	236.2/104.1	56	10	31	10
AMOZ	3.12	335.3/291.2	46	10	19	10
AMOZ	3.12	335.5/128.1	46	10	19	10

三．實(shí)驗(yàn)結(jié)果

0.5ppb豬肉基質(zhì)加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

表4 豬肉中0.5ppb加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果

名稱(chēng)	1（%）	2（%）	3（%）	平均回收率（%）	RSD（%）
AMOZ	109.43	97.84	109.75	105.67	6.42
SEM	91.81	88.91	88.22	89.65	2.12
AHD	80.68	82.11	77.25	80.01	3.12
AOZ	83.94	80.70	80.85	81.83	0.02

四、實(shí)驗(yàn)結(jié)論

Qdaura卓睿^TM全自動(dòng)固相萃取儀整機(jī)采用密封避光設(shè)計(jì)，用其進(jìn)行硝基呋喃代謝物的前處理操作，全凈化過(guò)程可在避光條件下進(jìn)行，保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性。Cleanert^®PEP-2固相萃取柱和Venusil^® MP C18色譜柱*可以滿(mǎn)足國(guó)標(biāo)對(duì)于硝基呋喃代謝物的檢測(cè)要求，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，重現(xiàn)性好。

五、訂貨信息

表5 實(shí)驗(yàn)儀器及耗材

產(chǎn)品名稱(chēng)	規(guī)格	訂貨信息
Qdaura 卓睿™全自動(dòng)固相萃取	4通道24位	SPE-40
Cleanert^® PEP-2固相萃取柱	60mg/3ml，50支/包	PE0603-2
Venusil^® MP C18液相色譜柱	2.1×150mm，5µm，100Å	VA951502-0

附錄A

圖1 4種硝基呋喃代謝物總離子圖

圖2 SEM（209/166）質(zhì)譜圖

圖3 AOZ（236/134）質(zhì)譜圖

圖4 AHD（249/134）質(zhì)譜圖

圖5 AMOZ（335/291）質(zhì)譜圖

附錄B

圖6 卓睿全自動(dòng)固相萃取儀自動(dòng)凈化方法

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豬肉中四種硝基呋喃類(lèi)代謝物殘留量測(cè)定（SPE-LC/MS/MS）-依國(guó)標(biāo)