色譜分析實戰(zhàn)館｜SPE柱回收率上不去？別讓“過度干燥”背了鍋！

更新時間：2026-03-27

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各位實驗室伙伴，大家好！

為了幫大家高效破解液相分析實驗痛點，咱們全新專欄【色譜分析實戰(zhàn)館】正式上線！本專欄主打一期一個小問題，不講冗余理論，只講實操干貨，精準解決實驗日常難題。

首期我們聚焦 SPE操作高頻痛點：明明規(guī)范操作，目標物回收率卻持續(xù)偏低、重現性差，深挖根源竟是極易被忽視的填料過度干燥。

樣品回收率低？可能是過度干燥導致

核心原理說明

大多數采用硅膠基質填料的反相固相萃取（如 C18）應用中，小柱（或 96孔板）首先用有機溶劑（如甲醇）活化，隨后用水或緩沖液平衡。

若硅膠基質 SPE填料在活化/平衡步驟中長時間干涸，會導致目標分析物保留變差，極性化合物尤為明顯。

為什么過度干燥會導致保留變差？

C18固相萃取柱以硅膠為基質，表面鍵合十八烷基疏水長鏈，靠疏水作用吸附目標物，屬于反相保留機制：

正常潤濕狀態(tài)下，C18 疏水鏈舒展，吸附位點充足，保留穩(wěn)定；填料過度干燥后，硅膠表面硅羥基團聚縮合，會帶動 C18 疏水鏈蜷縮折疊，有效吸附位點大幅減少；同時干涸填料難以被水溶液浸潤，樣品穿透分散快，最終導致目標物保留變差、回收率下滑。

因此，為獲得準確、重現性好的結果，使用者必須在這一關鍵步驟中嚴格控制操作。

對照實驗驗證

我們用Strata C18?T（1 g/6 mL）小柱開展對照測試，均上樣 4 mL藍色染料（CuCl?）：

A 柱（過度干燥組）：先用 12 mL甲醇活化，高真空干燥10分鐘，再用12 mL水平衡；結果顯示藍色染料在填料層中均勻分散，保留差、穿透明顯。

B 柱（正常活化組）：甲醇活化后立即用水平衡，不進行干燥；結果顯示藍色染料在填料層頂部形成緊致、集中的條帶。

防止意外過度干燥、避免分析物損失的要點

任何步驟均不可讓填料層干涸（方法明確要求除外）。

用重力流替代負壓真空，避免過度抽干。

采用低速離心（如 500 RPM）或正壓操作。

改用聚合物基質等效填料：此類填料不會因間歇性干燥而出現保留與回收率波動。

本期實戰(zhàn)小結

SPE 前處理出現回收率偏低的情況，填料過度干燥是活化平衡階段極易被忽視的常見誘因，大家排查問題時可重點關注這一細節(jié)。

SPE 小柱，要“潤"不要“干"，保留才穩(wěn)，回收率才高！

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